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  • 上海般諾生物科技有限公司

    PCR基因擴增儀的工作原理及保養

      PCR基因擴增儀的工作原理: PCR反應一般設置20~40次循環,每一循環包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環的產物作為下一個循環的模板。PCR的擴增效率很高,如果循環次數是30次,那么新生DNA片段理論上達到230拷貝(約為109個分子)。 PCR反應每個循環的三個基本反應步驟如下:①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA產物解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:溫度升到72℃左右,DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需 2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。 PCR技術的特異性取決于引物與模板結合的特異性。 PCR儀也叫基因擴增儀,它是利用PCR技術對特定基因做體外的大量合成,用于以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。

      PCR基因擴增儀主要作用原理與基本計量儀器相似,對計量要素要求較高,一旦失控,儀器將不能正常工作,所以PCR基因擴增儀也需要定期保養,依賴自然風降溫的PCR基因擴增儀尤需注意。

      在儀器的維護保養中需要注意的問題:

      1)PCR基因擴增儀需要定期檢測,一般半年至少一次

      2)PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1~2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。

      3)PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的制冷系統,對風冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。

      4)一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請專業人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。

     

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